Vzorec Priprava
Pri opazovanju osebka, prepuščeni svetlobi, mora svetlobe skozi vzorcu, da se tvori sliko. Debelejši osebek, manj svetlobe skozi. Čim manj svetlobe, ki prehaja skozi, temnejša slika. Zato morajo biti osebki tanka (0,1 do 0,5 mm). Mnogi živijo morajo biti osebki narežemo na tanke delov pred opazovanjem. Primerki kamnin ali polprevodniki so preveč debela, da se prerezana in upoštevati oddane svetlobe, zato jih opazimo jih svetloba odbija od njihovih površin.
Fluorescenčno mikroskopijo
A fluorescenčni mikroskop uporablja živo srebro ali ksenonske luči za proizvajajo ultravijolično svetlobo. Svetloba prihaja v mikroskopom in udari paraboličnim zrcalom - ogledalo, ki odseva eno valovne dolžine in omogoča drugo območje skozi. Dikroičnih ogledalo odseva ultravijolično svetlobo do primerka. Ultravijolična svetloba vznemirja fluorescence v molekul v vzorcu. Cilj leča zbira fluorescentno-valovne dolžine svetlobe, proizvedene. Ta fluorescentna svetloba prehaja skozi paraboličnim zrcalom in filtrom ovir (ki odpravlja razen fluorescentno valovne dolžine), zaradi česar je na okular, da se oblikuje podobo.
Lahko bodisi pojavljajo v naravi ali so uvedena fluorescentne molekule v vzorcu . Na primer, lahko obarvajo celic z barvilom imenuje kalceina /AM. Sam po sebi, ta barvilo ne fluorescentno. AM del molekule skriva del kalceina molekule, ki se veže kalcij, ki je fluorescentno. Ko ste mix kalceina /AM z raztopino kopanje celice, barvilo prehaja v celico. Žive celice imajo encim, ki odpravlja AM odsek, ujame kalceina znotraj celice in omogoča kalceina da veže kalcij, tako da fluorescira zeleno pod ultravijolično svetlobo. Mrtve celice nimajo več tega encima. Zato bo žive celice fluorescirajo zeleno in odmrle celice ne fluorescirajo. Ogledate si lahko odmrle celice v istem vzorcu, če zmešamo v drugi barvilom imenovanim propidium jodid, ki prodre le odmrle celice. Propidijevim jodidom veže na DNK v jedru in fluorescira rdeče pod ultravijolično svetlobo. Ta tehnika dvojne barvilo se uporablja pri toksikoloških študijah za ugotavljanje odstotka celične populacije, ki je ubitih ko obdelamo z neko okolja kemikalije, kot pesticid.
Fluorescent podobo kultiviranih podganjih možganskih celic. Žive celice obarvajo z kalceina (levo) in odmrlih celic obarva s propidijevim jodidom (desno).
Photo courtesy Theresa M. Freudenrich
Fluorescent podobo kultiviranih rat-možganskih celic. Žive celice obarvajo z kalceina (levo) i
